Uttalandet gjordes på torsdagen nära inpå USA:s president Joe Bidens planerade samtal med den ukrainske presidenten Volodymyr Zelenskyj samt ledare för några länder belägna vid den ryska gränsen som oroas över Kremls militära upptrappning.
Under torsdagen höll Putin ett möte med ett råd knutet till det ryska presidentämbetet och det var där han fick en fråga om diskriminering av rysktalande utanför Rysslands gränser.
– Jag måste säga att russofobi är det första steget mot folkmord, svarade den ryske presidenten.
– Ni och jag vet vad som händer i Donbas, fortsatte han med syftning på en av konfliktzonerna i östra Ukraina.
– Det liknar sannerligen folkmord.
USA och dess allierade har den senaste tiden anklagat Ryssland för att planera en invasion av sitt grannland Ukraina – en anklagelse som Ryssland har tillbakavisat.
Tidigare i veckan höll Putin och Biden ett digitalt toppmöte. Ukrainafrågan stod högst upp på dagordningen, och enligt Biden ska han ha sagt till Putin att mycket hårda ekonomiska sanktioner var att vänta om Ryssland attackerar Ukraina.